高效液相色譜儀的操作步驟及注意事項
液相色譜儀根據(jù)固定相是液體或是固體，又分為液-液色譜(LLC）及液-固色譜(LSC）�，F(xiàn)代液相色譜儀由高壓輸液泵、進樣系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)、色譜柱、檢測器、信號記錄系統(tǒng)等部分組成。與經典液相柱色譜裝置比較，具有高效、快速、靈敏等特點。下面是小編整理的高效液相色譜儀的操作步驟及注意事項，一起來看看吧。
一、操作步驟：
1.開機前先將流動相過濾和超聲：水流動相用混合濾膜（0.2μm）過濾,有機流動相用有機濾膜過濾，之后超聲脫氣15-20分鐘。（過濾的目的是除去流動相里的雜質，以免雜質進入色譜柱堵塞色譜柱；超聲的目的是排除流動相里面的氣體，以防氣體進入色譜柱損害色譜柱，影響柱效能）
注：試驗過程中由于只有0.45μm的混合濾膜，第一次使用時感覺效果不好，于是過濾水時同時使用兩張混合濾膜過濾水流動相。
2.超聲結束后，將流動相放置到規(guī)定位置（1號泵接水流動相，2號泵接有機流動相），開機逐個排氣（先啟動泵，排氣結束后再打開檢測器）。
3.排氣結束后，關閉所有排氣閥。先用純有機流動相沖洗色譜柱20-30分鐘，基線走穩(wěn)之后，再打開水流動相（注意：水流動相和有機流動相流速之和為1ml/min），繼續(xù)走基線，直到基線平穩(wěn)。
注意：實驗結束后，再用純有機流動相沖洗色譜柱20-30分鐘，沖出色譜柱內殘留的樣品物質，預防長時間不使用儀器樣品的殘留物質沉積在色譜柱內，導致下次使用難以沖出，色譜柱柱壓偏高，基線不穩(wěn)，出現(xiàn)大量鬼峰。（不同規(guī)格的色譜柱其所允許的最大流速之和不同）
4.走基線時，應將進樣閥處于Load狀態(tài)，用注射器進樣時應快速進樣，進樣后將進樣閥立即扳回到Inject狀態(tài)，此時液相系統(tǒng)開始進入采樣狀態(tài)。采樣結束后，可在數(shù)據(jù)分析里面查看分析結果并可進行編輯，也可以在脫機狀態(tài)下查看樣品的分析結果并編輯。
二、使用中常見的問題及注意事項
1.過濾時有時會出現(xiàn)流動相漏液�？赡艿脑蚴菫V膜放置不正確（有點偏）和接頭有點錯位，導致流動相從縫隙中漏出。
注意：操作時，應先向濾瓶內倒入少量流動相，觀察是否漏液并開始過濾，若未漏液，再向濾瓶中添加流動相。
2.超聲時，瓶外液體的液面應高于瓶內流動相的液面，否則流動相內的氣體可能無法排出液體，氣體仍然殘留在流動相內，以致開機排氣時無氣泡排出。
3.開機排氣結束后，應先將流動相流量調小，再關閉排氣閥，否則會導致柱壓瞬間升高超過壓力上限，致使泵停止工作。
4.反相高效液相色譜儀沖洗柱子時，應盡量避免使用純水流動相沖洗柱子，因為水極性強，會損害色譜柱（反相高效液相色譜儀的色譜柱C18是非極性的），導致柱效下降。
5.沖洗色譜柱時，還可輔助以不同比例的混合流動相沖洗色譜柱，以沖出不同極性的殘留物質，但最后還是要用純有機流動相沖洗色譜柱一段時間。
6.在實驗過程中會出現(xiàn)壓力超過上限或壓力偏高（在壓力上限范圍內有機流動相和水流動相流速之和無法達到1ml/min），有可能是柱內有殘留物質未被沖出，此時應用較大流速（≤1ml/min）的有機流動相充分沖洗色譜柱。若條件允許，也可采用梯度洗脫的方式沖洗色譜柱。壓力過高也有可能是濾頭堵塞，此時可將濾頭取出放到有機溶劑中超聲。
7.若隔天或更長時間不使用液相色譜儀，應將兩流動相瓶中均倒入純的有機流動相（因為水流動相長時間不用會滋生細菌，污染濾頭和色譜柱，導致下次開機使用時會出現(xiàn)鬼峰，基線不穩(wěn)）。
8.進樣時所進樣品的體積應不小于色譜柱的最大容積，且進樣時注射器里的氣泡一定要排出，不可將氣泡打進色譜柱。
工作原理
系統(tǒng)由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱（固定相）內，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中作相對運動時，經過反復多次的吸附-解吸的分配過程，各組分在移動速度上產生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來高效液相色譜儀主要有進樣系統(tǒng)、輸液系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，下面將分別敘述其各自的組成與特點。
進樣系統(tǒng)
一般采用隔膜注射進樣器或高壓進樣間完成進樣操作，進樣量是恒定的。這對提高分析樣品的重復性是有益的。
輸液系統(tǒng)
該系統(tǒng)包括高壓泵、流動相貯存器和梯度儀三部分。高壓泵的一般壓強為l．47～4．4X10Pa，流速可調且穩(wěn)定，當高壓流動相通過層析柱時，可降低樣品在柱中的擴散效應，可加快其在柱中的移動速度，這對提高分辨率、回收樣品、保持樣品的生物活性等都是有利的。流動相貯存器和梯度儀，可使流動相隨固定相和樣品的性質而改變，包括改變洗脫液的極性、離子強度、PH值，或改用競爭性抑制劑或變性劑等。這就可使各種物質（即使僅有一個基團的差別或是同分異構體）都能獲得有效分離。
分離系統(tǒng)
該系統(tǒng)包括色譜柱、連接管和恒溫器等。色譜柱一般長度為10～50cm（需要兩根連用時，可在二者之間加一連接管），內徑為2～5mm，由"優(yōu)質不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦合金等材料制成，住內裝有直徑為5～10μm粒度的固定相（由基質和固定液構成）．固定相中的基質是由機械強度高的樹脂或硅膠構成，它們都有惰性（如硅膠表面的硅酸基因基本已除去）、多孔性（孔徑可達1000?）和比表面積大的特點，加之其表面經過機械涂漬（與氣相色譜中固定相的制備一樣），或者用化學法偶聯(lián)各種基因（如磷酸基、季胺基、羥甲基、苯基、氨基或各種長度碳鏈的烷基等）或配體的有機化合物。因此，這類固定相對結構不同的物質有良好的選擇性。例如，在多孔性硅膠表面偶聯(lián)豌豆凝集素（PSA）后，就可以把成纖維細胞中的一種糖蛋白分離出來。
另外，固定相基質粒小，柱床極易達到均勻、致密狀態(tài)，極易降低渦流擴散效應。基質粒度小，微孔淺，樣品在微孔區(qū)內傳質短。這些對縮小譜帶寬度、提高分辨率是有益的。根據(jù)柱效理論分析，基質粒度小，塔板理論數(shù)N就越大。這也進一步證明基質粒度小，會提高分辨率的道理。
再者，高效液相色譜的恒溫器可使溫度從室溫調到60C，通過改善傳質速度，縮短分析時間，就可增加層析柱的效率。
【高效液相色譜儀的操作步驟及注意事項】相關文章：
光療甲的操作步驟和注意事項09-08
科目三考試詳細操作步驟及注意事項09-20
科目二側方停車操作步驟及注意事項07-24
科目三靠邊考試操作步驟及注意事項08-17
科目三靠邊停車的操作步驟和注意事項10-24
php操作mysql步驟09-15
論壇推廣的操作步驟11-05
檔位的正確操作步驟07-22
科目二曲線行駛操作步驟及考試的注意事項10-20